载脂蛋白A5对人脂肪间充质干细胞成脂分化的影响及其机制的实验研究

摘要：目的 探讨载脂蛋白A5(ApoA5)对人脂肪间充质干细胞(AMSC)成脂分化的影响及其机制.方法 脂肪组织来源于2015年2至7月在中南大学湘雅二医院进行腹部外科手术治疗的40例患者,以手术方法获取患者皮下脂肪组织,经胶原酶消化法得到人AMSC后诱导分化为成熟脂肪细胞,分别以600、1200 ng/ml ApoA5蛋白干预细胞,即为ApoA5600 ng/ml组、ApoA51200 ng/ml组,并以不加ApoA5蛋白干预的细胞为对照组.于诱导分化后第7、14天收获细胞,进行以下检测:通过甘油三酯(TG)检测试剂盒检测ApoA5对TG含量的影响;通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测ApoA5对脂肪酸结合蛋白(aP2)、脂肪酸合酶(FAS)等成脂分化标志物mRNA表达的影响;通过RT-qPCR和Western blot法检测ApoA5对诱导细胞死亡的DFF45样效应因子C(CIDEC)mRNA和蛋白表达的影响;通过RT-qPCR和Western blot法检测ApoA5对CCAAT/增强子结合蛋白β(C/EBPβ)mRNA和蛋白表达的影响.利用慢病毒转染技术,在AMSC中过表达CIDEC,分为慢病毒阴性对照组、慢病毒过表达CIDEC组及慢病毒过表达CIDEC+ApoA5组(ApoA5干预浓度为1200 ng/ml),检测在CIDEC过表达的情况下ApoA5对AMSC成脂分化过程中上述指标的影响.结果 (1)ApoA5对AMSC中TG含量的影响:干预后第7、14天,ApoA5600和1200 ng/ml组AMSC中TG含量均低于对照组(P均<0.05).(2)ApoA5对AMSC中aP2和FAS mRNA表达水平的影响:干预后第7天,ApoA5600和1200 ng/ml组AMSC中aP2、FAS mRNA表达水平均明显低于对照组(P均<0.05).干预后第14天,ApoA5600和1200 ng/ml组AMSC中aP2、FAS mRNA表达水平均进一步低于对照组(P均<0.05).(3)ApoA5对AMSC中CIDEC mRNA和蛋白表达水平的影响:干预后第7天,ApoA5600、1200 ng/ml组AMSC中CIDEC mRNA及蛋白表达水平均明显低于对照组(P均<0.05).干预后第14天,ApoA5600和1200 ng/ml组AMSC中CIDEC mRNA及蛋白表达水平均进一步低于对照组(P均<0.05).(4)ApoA5对AMSC中C/EBPβmRNA和蛋白表达水平的影响:干预后第7天,ApoA5600、1200 ng/ml组AMSC中C/EBPβmRNA及蛋白表达水平均明显低于对照组(P均<0.05).干预后第14天,ApoA5600和1200 ng/ml组AMSC中C/EBPβmRNA及蛋白表达水平均进一步低于对照组(P均<0.05).(5)CIDEC过表达后ApoA5对AMSC中TG含量的影响:干预后第7、14天,慢病毒过表达CIDEC组AMSC中TG含量均高于慢病毒阴性对照组(P均<0.05),而慢病毒过表达CIDEC组AMSC中TG含量与慢病毒过表达CIDEC+ApoA5组比较差异则均无统计学意义(P均>0.05).(6)CIDEC过表达后ApoA5对AMSC中aP2和FAS mRNA表达水平的影响:干预后第7天,慢病毒过表达CIDEC组AMSC中aP2、FAS mRNA表达水平均高于慢病毒阴性对照组(P均<0.05).干预后第14天,慢病毒过表达CIDEC组AMSC中aP2、FAS mRNA表达水平均进一步高于慢病毒阴性对照组(P均<0.05).而干预后第7、14天,慢病毒过表达CIDEC组AMSC中aP2、FAS mRNA表达水平与慢病毒过表达CIDEC+ApoA5组比较差异均无统计学意义(P均>0.05).(7)CIDEC过表达后ApoA5对AMSC中C/EBPβmRNA和蛋白表达水平的影响:干预后第7天,慢病毒过表达CIDEC组AMSC中C/EBPβmRNA和蛋白表达水平均高于慢病毒阴性对照组(P均<0.05).干预后第14天,慢病毒过表达CIDEC组AMSC中C/EBPβmRNA和蛋白表达水平均进一步高于慢病毒阴性对照组(P均<0.05).而干预后第7、14天,慢病毒过表达CIDEC组AMSC中C/EBPβmRNA和蛋白表达水平与慢病毒过表达CIDEC+ApoA5组比较差异均无统计学意义(P均>0.05).结论 ApoA5可抑制AMSC成脂分化,而这一作用可能是通过下调成脂分化关键因子CIDEC的表达实现的.