肿瘤坏死因子α抑制剂通过激活Notch1信号通路减轻创伤小鼠心肌再灌注损伤

摘要：目的 研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)抑制剂对创伤后心肌缺血再灌注(ML/R)损伤的影响,探讨跨膜蛋白受体Notch1在其中的作用.方法 健康雄性c57小鼠,10～ 12周龄.建立创伤合并MI/R小鼠模型后分为5组,即溶剂对照组、依那西普组、乱码RNA对照组、Notch1 siRNA组和依那西普+ Notch1 siRNA组,每组8只小鼠.采用Noble-Collip鼓建立创伤小鼠模型.创伤5d后,通过心肌点注射特异性siRNA(20 μg)建立Notch1降低小鼠模型.创伤7d后,建立MI/R小鼠模型,即麻醉小鼠后经左胸前第4、5肋间暴露心脏,结扎冠状动脉左前降支,缺血30 min后,解开结扎线实现再灌注.需要依那西普干预的小鼠均是在再灌注前10 min腹腔注射依那西普8 mg/kg.ELISA法检测血浆中TNF-α和肌钙蛋白I(cTnI)含量以及心肌组织中硝基酪氨酸水平.再灌注24 h后,利用小动物超声系统测定小鼠左心室射血分数(LVEF).伊文思蓝和2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)双染缺血再灌注心肌组织,计算梗死心肌面积比值.采用caspase-3试剂盒测定心肌caspase-3活性.蛋白印迹法测定心肌TNF-α蛋白和Notch1胞内片段(Notch1 ICD)含量.化学发光法测定心肌超氧阴离子含量.结果 (1)依那西普组和溶剂对照组小鼠cTnI、LVEF、心肌梗死面积和心肌caspase-3活性的检测结果:依那西普组小鼠cTnI的含量明显低于溶剂对照组(P＜0.01),LVEF明显高于溶剂对照组(P＜0.01),心肌梗死面积明显低于溶剂对照组(P＜0.01).依那西普组小鼠心肌组织中caspase-3活性明显低于溶剂对照组(P＜0.01).(2)依那西普组和溶剂对照组小鼠心肌中TNF-α蛋白和Notch1 ICD含量及血浆TNF-α浓度的检测结果:依那西普组小鼠心肌中TNF-α蛋白含量明显低于溶剂对照组(P＜0.01),且血浆中TNF-α浓度亦明显低于溶剂对照组(P＜0.01).而依那西普组小鼠心肌中Notch1 ICD含量则明显高于溶剂对照组(P＜0.05).(3) Notch1 siRNA组和乱码RNA对照组小鼠cTnI、LVEF、心肌梗死面积和心肌caspase-3活性的检测结果:Notch1 siRNA组小鼠cTNI的含量明显高于乱码RNA对照组(P＜0.05),LVEF明显低于乱码RNA对照组(P＜0.05),心肌梗死面积明显大于乱码RNA对照组(P＜0.05).Notch1 siRNA组小鼠心肌caspase-3活性明显高于乱码RNA对照组(P＜0.05).(4)溶剂对照组、依那西普组、依那西普+ Notch1 siRNA组小鼠心肌超氧阴离子和硝基酪氨酸含量的检测结果:依那西普组小鼠心肌超氧阴离子和硝基酪氨酸的含量均明显低于溶剂对照组(P均＜0.01).而依那西普+ Notch1 siRNA组小鼠心肌超氧阴离子和硝基酪氨酸的含量则均明显高于依那西普组(P均＜0.05).结论 TNF-α抑制剂可减轻小鼠创伤后MI/R损伤,其机制可能与激活Notch1信号通路而抑制心肌氧化/硝化反应有关.