硫化氢对过氧化氢诱导的原代乳鼠心肌细胞氧化损伤的影响及其机制

摘要：目的 探讨硫化氡(H2S)对过氧化氢(H2O2)诱导的原代乳鼠心肌细胞氧化损伤的影响及其可能机制.方法 在常规培养3 d的原代乳鼠心肌细胞中加入不同浓度(10、100、1000 μmol/L)的H2O2处理24 h建立心肌细胞氧化损伤的模型,分别为10 μmol/L H2O2模型组、100μmol/L H2O2模型组及1000 μmol/L H2O2模型组,另以完全培养基进行常规培养作为对照组.另外,NaHS配成不同的终浓度(1、10、100μmol/L)单纯作片用或分别与100 μmol/L H2O2共同作用于心肌细胞24 h探讨NaHS对H2O2诱导的原代乳鼠心肌细胞的影响,分别为1μmol/L NaHS+100 μmol/L H2O2处理组、10 μmol/L NaHS+100 μmol/L H2O2处理组、100 μmol/L NaHS+100 μmol/LH2O2处理组、单纯10μmol/L NaHS处理组、单纯100 μmol/L NaHS处理组,另设100 μmol/L H2O2模型组和以完全培养基进行常规培养作为对照组.应用 MTT比色法检测细胞存活率,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)的活力,硫代巴比妥酸比色法检测丙二醛(MDA)含量,化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)活性,流式细胞术检测细胞凋亡百分率,罗丹明123(Rh 123)染色荧光显微镜照相检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP),2,-7,-二氯荧光黄双乙酸盐染色荧光显微镜照相检测细胞内的活性氧簇(ROS)水平.结果 10、100、1000 μmol/LH2O2处理原代乳鼠心肌细胞24 h后,心肌细胞存活率和培养基上清液SOD活力均呈剂量依赖性地下降,细胞蛋白裂解液MDA含量、细胞培养液LDH活性则呈剂量依赖性地升高.100 μmol/L H2O2 模型组细胞存活率显著低于对照组(P=0.001),MDA含量显著高于对照组(P =0.003),10 μmol/L H2O2模型组的SOD活力及LDH活性与对照组比较差异已有统计学意义(P分别为0.013和0.028).1、10和100 μmol/L的NaHS与100μmol/L H2O2共同作用心肌细胞24 h可呈剂量依赖性地抑制H2O2诱导的细胞存活率、SOD活力的下降以及LDH活性、MDA含量的升高,其中10和100μmol/L NaHS+ 100 μmol/L H2O2处理组与100μmol/L H2O2模型组比较差异均有统计学意义(P均＜0.05).100 μmol/L H2O2模型组DCF荧光强度显著高于对照组(P=0.003),而10和100 μmol/L NaHS+ 100 μmol/L H2O2处理组DCF荧光强度均显著低于100 μmol/L H2O2模型组(p分别为0.017和0.000).此外,单纯10和100 μmol/L NaHS处理组DCF荧光强度与对照组比较差异均无统计学意义.100 μmol/L H2O2模型组MMP显著低于对照组(P =0.000),而10和100 μmol/L NaHS+100 μmol/L H2O2处理组MMP均高于100μmol/L H2O2模型组(P均＜0.05).此外,单纯10和100 μ mol/L NaHS处理组MMP与对照组比较差异均无统计学意义.10和100μmol/L NaHS+ 100 μmol/L H2O2处理组心肌细胞的凋亡率分别为(36.7±4.9)％和(20.1±1.9)％均显著低于100 μmol/L H2O2模型组[(48.9±5.6)％],p均＜0.05.结论 H2S可对抗H2O2诱导的心肌细胞氧化损伤,其机制可能与减少ROS生成、升高MMP以及降低心肌细胞凋亡率有关.